Yo konnen sekans jenomik pifò viris yo.Sond asid nikleik ki se segman kout nan ADN ki fèt pou ibrid ak ADN viral konplemantè oswa segman RNA.Reyaksyon chèn polymerase (PCR) se yon teknik ki pi efikas pou deteksyon viral.Metòd dyagnostik debi segondè yo te devlope dènyèman.
A. Teknik ibridasyon asid nikleik
Ibridizasyon asid nikleik, sitou ki gen ladan Southern blotting (Southern) ak Northern blotting (Nò), se yon nouvo teknik ki devlope rapid nan jaden dyagnostik viris la.Rezon ki fè tès ibridasyon an se sèvi ak segman kout ADN (ki rele "sond") ki fèt pou ibrid ak segman ADN viral oswa RNA konplemantè.Pa chofaj oswa tretman alkalin, ADN oswa RNA sib doub-chèn separe an yon sèl fil epi answit yo imobilize sou yon sipò solid.Apre sa, pwofonde yo ajoute ak ibrid ak ADN oswa RNA sib la.Kòm sond la make ak izotòp oswa niklid ki pa radyo-aktif, ADN oswa RNA sib la ka detekte atravè otoryayografi oswa nan sistèm biotin-avidin la.Piske pifò jenom viral yo te klonaj ak sekans, yo ka detekte lè l sèvi avèk sekans viris espesifik kòm sond nan echantiyon an.Kounye a, metòd ibridasyon yo gen ladan: dot blot, ibridizasyon in situ nan selil, DNA blot (DNA) (Southern blot) ak RNA blot (RNA) (Northern blot).
B.PCR Teknoloji
Nan dènye ane yo, yo te devlope yon seri de teknik anplifikasyon asid nikleyè in vitro ki baze sou PCR, pou teste viris ki pa sansib oswa ki pa kiltive.PCR se yon metòd ki ka fè sentèz sekans ADN espesifik pa reyaksyon polymerase in vitro.Pwosesis PCR la gen ladan yon sik tèmik twa etap: denaturasyon, rkwir, ak ekstansyon.Lè sa a, nan tanperati ki ba (37 ℃ ~ 60 ℃), de primè nukleotid sentèz rkwir nan segman ADN konplemantè yo;Lè nou konsidere ke nan tanperati ki apwopriye a pou anzim Taq (72 ℃), sentèz nouvo chenn ADN kòmanse nan jadendanfan 3'end lè l sèvi avèk ADN konplemantè kòm modèl ak nukleotid sèl kòm materyèl.Se konsa, apre chak sik, yon sèl chèn ADN ka anplifye nan de chenn.Repete pwosesis sa a, chak chèn ADN sentèz nan yon sik ka itilize kòm modèl nan pwochen sik la, ak kantite chenn ADN double nan chak sik, ki vle di pwodiksyon an nan PCR anplifye nan yon vitès boutèy 2n.Apre 25 a 30 sik, pwodiksyon PCR idantifye atravè elektwoforèz, epi pwodwi ADN espesifik yo ka obsève anba limyè UV (254nm).Pou avantaj espesifik, sansiblite, ak konvenyans, PCR te adopte nan dyagnostik klinik anpil enfeksyon viral tankou HCV, VIH, CMV, ak HPV.Kòm PCR trè sansib, li ka detekte ADN viris nan nivo fg, operasyon an ta dwe fèt ak anpil atansyon pou evite fo pozitif.Anplis de sa, rezilta pozitif nan tès asid nikleyik pa vle di gen viris enfektye vivan nan echantiyon an.
Avèk aplikasyon lajè PCR teknik, nouvo teknik ak metòd yo devlope ki baze sou teknik PCR pou objektif tès diferan.Pou egzanp, PCR quantitative an tan reyèl ka detekte chaj viral;in situ PCR yo itilize pou idantifye enfeksyon viris nan tisi oswa selil;PCR enbrike a ka ogmante espesifik PCR la.Pami yo, an tan reyèl PCR quantitative te devlope pi rapid.Anpil nouvo teknik, tankou sond idwoliz TaqMan, sond ibridizasyon, ak sond molekilè beacon, yo te konbine nan tan reyèl teknik PCR quantitative, ki lajman itilize nan rechèch klinik.Anplis idantifye chaj viral nan likid kò pasyan yo avèk presizyon, metòd sa a ka itilize tou pou detekte mutan ki toleran dwòg.Se poutèt sa, an tan reyèl PCR quantitative sitou aplike nan evalyasyon efè guérison ak siveyans tolerans dwòg.
C. Deteksyon wo-debi nan asid nikleyik viral
Pou satisfè bezwen yo pou fè dyagnostik vit nouvo maladi enfektye emèjan, yo te etabli divès kalite metòd deteksyon wo-debi, tankou chips ADN (ADN).Pou chips ADN, sond espesifik yo sentèz epi yo tache ak ti chips Silisyòm nan dansite trè wo pou fòme ADN sond microarray (DNA) ki ka hybridized ak echantiyon.Siyal ibridizasyon an ka imajine pa mikwoskòp konfokal oswa eskanè lazè epi yo ka plis trete pa òdinatè a epi yo ka jwenn gwo seri done konsènan jèn diferan.Gen de kalite chip ADN."Chip sentèz la" se jan sa a: oligonukleotid espesifik yo sentèz dirèkteman sou chips yo.Yon lòt se chip pisin ADN.Jèn yo klonaj oswa pwodwi PCR yo enprime lòd sou glisad la.Avantaj nan teknoloji chip ADN se deteksyon an similtane nan yon gwo kantite sekans ADN.Dènye vèsyon chip deteksyon patojèn ka idantifye plis pase 1700 viris imen an menm tan.Teknoloji chip ADN rezoud pwoblèm yo nan metòd tradisyonèl ibridasyon asid nikleyè e li gen aplikasyon trè laj nan dyagnostik viral ak etid epidemyolojik.
Tan poste: Dec-23-2020